超聲與微波結合的蛋清巴氏殺菌:對結構和功能特性的影響
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引言
液態(tài)蛋清(LEW)是由新鮮雞蛋制成的產品,經過去殼、加工和包裝等步驟(Liu等人,2020)。與帶殼雞蛋相比,LEW便于運輸,可延長保質期并提高雞蛋的利用率(Pei等人,2020)。LEW的微生物滅活方法通常是巴氏殺菌,其溫度主要是為了確保巴氏殺菌效果,但可能導致蛋白質變性、功能特性降低和高能耗(Lechevalier等人,2017)。過高的溫度會導致蛋白質聚集,影響LEW的發(fā)泡、乳化和凝膠特性(Espina,Monfort,´Alvarez,García - Gonzalo,& Pag´an,2014)。蛋白質的結構會在高溫下展開,內部基團隨著熱變性暴露在蛋白質表面。分子間和界面力發(fā)生改變,這將影響功能特性(Yoshinori Mine & Haga,1990)。Wang發(fā)現加熱處理后LEW的發(fā)泡能力下降(G. Wang & Wang,2009)。為了克服傳統(tǒng)熱處理工藝對LEW的不利影響,非熱技術已應用于巴氏殺菌,如高靜水壓(Barba,Koubaa,do Prado - Silva,Orlien,& Sant’Ana,2017)、脈沖電場巴氏殺菌(X. Li & Farid,2016)、輻照巴氏殺菌(Unluturk,Atilgan,Baysal,& Unluturk,2010)、脈沖光(J. Zhu等人,2019)和微濾(Mukhopadhyay,Tomasula,Luchansky,Porto - Fett,& Call,2010)。
MW巴氏殺菌已被證明適用于連續(xù)流體系統(tǒng)中的液體食品。MW技術可以產生體積熱和高能量效率(Auksornsri,Bornhorst,Tang,Tang,& Songsermpong,2018),并減少對食品感官和營養(yǎng)特性的有害影響(Soni,Smith,Thompson,& Brightwell,2020)。與傳統(tǒng)加熱技術需要傳熱介質或環(huán)境進行熱傳遞不同,MW技術使材料直接吸收MW能量并將其轉化為熱能。許多研究表明,MW在微生物滅活方面是有效的。連續(xù)流MW巴氏殺菌系統(tǒng)使蘋果酒中的大腸桿菌減少了5個對數級(Gentry & Roberts,2005)。連續(xù)微波處理的牛奶與間接超高溫處理的牛奶相比,具有更好的感官特性,而它們的微生物和生化參數沒有太大差異(D. A. Clare,2005)。然而,MW巴氏殺菌存在溫度分布不均勻的缺點,導致液體、固體和多組分食品中存在熱點和冷點(C. James,2002)。熱點和冷點的分布與電磁場強度有關(Guo,Sun,Cheng,& Han,2017)。熱點集中在電磁場強度高的區(qū)域,其局部過熱導致蛋白質變性,影響食品系統(tǒng)的均勻性。不均勻的加熱會損害食品的質量和質地(Hossan,Byun,& Dutta,2010)。在異質系統(tǒng)中,如牛奶、脂肪和膠體分散體,它們會阻礙離子遷移并降低電導率,加熱過程中的不均勻性會增加(Chandrasekaran,Ramanathan,& Basak,2013)。因此,實現微波加熱的均勻性是一個挑戰(zhàn)。
超聲(US)技術具有高頻和短波長的特點(Paniwnyk,2017)。US在液體介質中引起空化效應,產生氣泡和動力學變化(Y. Ma等人,2022)。空化氣泡的破裂會引發(fā)極端的剪切力,從而實現高效的混合和均質化(Soltani Firouz,Farahmandi,& Hosseinpour,2019)。US可以與其他巴氏殺菌方法結合,使系統(tǒng)更加分散,溫度分布更加均勻,從而提高巴氏殺菌效果。一些研究證明,結合熱和US(熱超聲)可以減少脫脂牛奶或奶油中的總纖溶酶和細菌活性,而不會對流變學和外觀產生不利影響(Vijayakumar,Grewell,Annandarajah,Benner,& Clark,2015)。熱超聲(35kHz,60℃)處理1分鐘可以抑制酵母和霉菌的生長,同時保護乳酸菌,并且酸乳飲料的物理化學和感官特性優(yōu)于熱處理的酸乳飲料(Erkaya,Baslar,Sengul,& Ertugay,2015)。結合液壓高壓和US導致在LWE中沙門氏菌的減少比單一處理更好(E. Huang,Mittal,& Griffiths,2006)。因此,超聲的空化效應可以增加傳質,減少微波過程中的不均勻加熱。結合微波和超聲技術已應用于生物材料的合成、提取或預處理(Z. Li,Wang,Zheng,& Guo,2020;Zhou,Zhang,Fang,& Liu,2015)。
本研究的目的是結合US和MW來克服MW巴氏殺菌的不均勻性,并減少對LEW功能特性的不利影響。在本研究中,我們揭示了IUM巴氏殺菌對LEW的結構、功能和流變特性的影響,為后續(xù)LEW巴氏殺菌的發(fā)展提供了基礎。 -
材料和方法
2.1. 材料
新鮮雞蛋購自當地超市。十二烷基硫酸鈉(SDS)和8 - 苯胺 - 1 - 萘磺酸(ANS)購自Sigma Chemical Reagents Co.(美國)。所有其他試劑均為分析純,購自國藥化學試劑有限公司(上海,中國)。雞蛋用清水清洗,并多次用75%酒精消毒。將蛋清從蛋黃中分離出來作為原始LEW樣品,并在4℃下冷藏保存。
2.2. 樣品制備
2.2.1. 蛋清的傳統(tǒng)巴氏殺菌
按照Gurtler等人(2015)的方法,將50mL樣品包裝在100mL燒杯中,加熱至58℃,并在磁力攪拌下保持4.5分鐘。然后,將它們在冰水中冷卻,并在4℃下冷藏保存。
2.2.1. 蛋清的傳統(tǒng)巴氏殺菌
按照Gurtler等人(2015)的方法,將50mL樣品包裝在100mL燒杯中,加熱至58℃,并在磁力攪拌下保持4.5分鐘。然后,將它們在冰水中冷卻,并在4℃下冷藏保存。
2.2.2. MW、US和IUM處理
樣品用微波超聲可控處理器(XH - 300A +,北京祥鵠科技發(fā)展有限公司,北京,中國)處理,該處理器可以通過自動調節(jié)MW功率來控制溫度。該設備具有高精度溫度傳感器(長150mm,直徑3mm),帶有鉑熱電阻(PT1000)。在處理過程中,溫度傳感器放置在反應容器中,以測量LEW樣品的內部溫度,測量精度不超過±0.1℃。
經MW處理的LEW樣品(MW - LEW)在4.5分鐘內加熱至57℃,并在自動MW功率下保持2分鐘。
經US處理的樣品(US - LEW)在700W恒定US功率下超聲處理4.5分鐘,并在最終溫度下保持2分鐘。
根據我們的初步研究,選擇了確保蛋白質穩(wěn)定性的IUM處理條件,如圖1所示。經IUM處理的樣品(IUM - LEW)在700W恒定US功率下超聲處理30秒,使LEW更加均勻。然后在4分鐘內用700W US功率和自動MW功率加熱至57℃,并在57℃下用自動MW功率保持2分鐘。
最后,樣品在冰水中迅速冷卻,并在4℃下冷藏保存。
樣品用微波超聲可控處理器(XH - 300A +,北京祥鵠科技發(fā)展有限公司,北京,中國)處理,該處理器可以通過自動調節(jié)MW功率來控制溫度。該設備具有高精度溫度傳感器(長150mm,直徑3mm),帶有鉑熱電阻(PT1000)。在處理過程中,溫度傳感器放置在反應容器中,以測量LEW樣品的內部溫度,測量精度不超過±0.1℃。
經MW處理的LEW樣品(MW - LEW)在4.5分鐘內加熱至57℃,并在自動MW功率下保持2分鐘。
經US處理的樣品(US - LEW)在700W恒定US功率下超聲處理4.5分鐘,并在最終溫度下保持2分鐘。
根據我們的初步研究,選擇了確保蛋白質穩(wěn)定性的IUM處理條件,如圖1所示。經IUM處理的樣品(IUM - LEW)在700W恒定US功率下超聲處理30秒,使LEW更加均勻。然后在4分鐘內用700W US功率和自動MW功率加熱至57℃,并在57℃下用自動MW功率保持2分鐘。
最后,樣品在冰水中迅速冷卻,并在4℃下冷藏保存。
2.3. 蛋白質穩(wěn)定性和巴氏殺菌效果的評估
2.3.1. 濁度
IUM、MW處理和巴氏殺菌的溫度范圍為51℃至63℃。
濁度以福爾馬肼濁度單位(FTU)測量。使用分光光度計(UV - 6100,湘儀實驗室儀器發(fā)展有限公司,湖南,中國)在660nm處測量濁度為0、4、10、20、40、80、100 FTU的標準溶液的吸光度,并獲得標準曲線。以蒸餾水為空白對照測量樣品的吸光度。根據標準曲線計算樣品的濁度(Z. Jiang等人,2022)。
2.3.1. 濁度
IUM、MW處理和巴氏殺菌的溫度范圍為51℃至63℃。
濁度以福爾馬肼濁度單位(FTU)測量。使用分光光度計(UV - 6100,湘儀實驗室儀器發(fā)展有限公司,湖南,中國)在660nm處測量濁度為0、4、10、20、40、80、100 FTU的標準溶液的吸光度,并獲得標準曲線。以蒸餾水為空白對照測量樣品的吸光度。根據標準曲線計算樣品的濁度(Z. Jiang等人,2022)。
